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人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒

简要描述:上海恒远生物ELISA试剂盒,美国RD试剂盒大量现货低价出售!凡在我司购买“人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒"为您提供来样检测服务(免费),客户只需把您的标本寄过来,我们保证出结果。:,。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2016-08-09
  • 访  问  量:275
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详细介绍

 人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒实验原理 :021—60449724, 

    产品规格:96人份/48人份 
    检测方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA) 
    产品用途:科研ELISA检测试剂盒.本公司可提供实验代测服务. 
    检测原理: 采用双抗体夹心ABC-ELISA法 
    需要而未提供的试剂和器材 
    1. 标准规格酶标仪 
    2. 高速离心机 
    3. 电热恒温培养箱 
    4. 干净的试管和Eppendof管 
    5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器 
    6. 蒸馏水,容量瓶等 
    标本的采集及保存 
    1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 
    2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 
    3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 
    注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。 
    标本的稀释原则: 
    首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。zui后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。 
    标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为4000 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释4000 pg/ml,2000 pg/ml,1000 pg/ml,500 pg/ml,250 pg/ml,125 pg/ml,62.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。 
    如配制2000 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)4000 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 
    生物素标记抗体的稀释原则: 
    临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 
    辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则: 
    临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 
    操作步骤 
    实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 
    1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 
    2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。 
    3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 
    4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。 
    5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 
    6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
    7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 
    8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 
    注: 
    1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。 
    2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 
    3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。 
    4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 
    5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 
    洗板方法 
    手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。 
    自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 
    计算 
    以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 
    注意事项 
    1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。 
    2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。 
    3. 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 
    4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。 
    5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。 
    6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。 
    7. 底物请避光保存。 
    8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 

人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒 实验原理 :021—60449724,

 

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