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●ELISA试剂盒,ELISPOT试剂盒
产品名称: 人抗核仁抗体(ANA)ELISA试剂盒
:021—60449724,
可测种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、猴、马…
可测标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液
规格:96T/48T 中英文双版说明书 提供代测 含税含运费
经营品牌:RD
人抗核仁抗体(ANA)ELISA试剂盒 操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。加样时,枪头应直接对准液面,切勿沿孔壁加样。
加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl,37℃,60分钟。
温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。
实验备注
用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及终止液。测量时先用此孔调OD值至零。
为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
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