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上海恒远生物长期供应各种科研类ELSIA试剂盒|检测试剂盒|酶联免疫试剂盒|生化试剂盒|免疫组化试剂盒|放免试剂盒|分子生物学试剂盒|金标检测试剂盒|OMEGA试剂盒|细胞调亡试剂盒…
产品名称:人抗神经节苷脂抗体(GM1)ELISA试剂盒
:021—60449724,
产品规格:96人份/48人份
各种种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、猪、犬、牛、羊…多年专业酶免服务,质量保证,免费提供代测服务。
标本齐全:血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液、关节液、胸腔溢液等…
保存条件:2-8℃
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。zui后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,使用前于6000-10000rpm离心30秒。每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以 上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为10 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释10 ng/ml, 5 ng/ml, 2.5 ng/ml, 1.25ng/ml, 0.62 ng/ml, 0.32ng/ml, 0.16 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制,用完丢弃,下次检测使用新鲜配置的标准品。
如配制5 ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)10 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:
打开瓶盖前请离心,收集瓶壁上的溶液。临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时 内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
打开瓶盖前请离心,收集瓶壁上的溶液。临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每 孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
人抗神经节苷脂抗体(GM1)ELISA试剂盒 操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。加样时,枪头应直接对准液面,切勿沿孔壁加样。
加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl,37℃,60分钟。
温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔显色不明显,即可终止)。
依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。
实验备注
用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及终止液。测量时先用此孔调OD值至零。
为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应 的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样 品的实际浓度。
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