人肺癌标志物ELISA试剂盒

简要描述：人肺癌标志物ELISA试剂盒，Elisa试剂盒/葡聚糖凝胶/血清细胞/抗体,上海恒远生物提供各种属Elisa试剂盒，生化试剂，抗体抗原，标准品。产品齐全，质量保证，在业界及师生间有着良好的声誉。

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厂商性质：生产厂家
更新时间：2016-09-28
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    【需要而未提供的试剂和器材】
    1． 37℃恒温箱。
    2．标准规格酶标仪。
    3．自动洗板机。
    4．单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
    5．蒸馏水，容量瓶等
    6．干净的试管和Eppendof管。
    【注意事项】
    1. 从-20℃取出的试剂盒，在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
    2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
    3. 配制各种试剂时，切记混匀！
    4. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
    5. 建议所有人IL-1β标准品、样本都做双份检测。
    6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
    7. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
    【洗板方法】
    手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
    自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
    【样品的准备和保存】
    样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
    血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
    细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
    【样品稀释的一般原则】
    用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。
    【试剂的准备和保存】
    A. 人IL-1β标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，*溶解后做倍比稀释。
    稀释后的人IL-1β标准品在2小时内使用。
    B．生物素标记人IL-1β抗体工作液：在使用前2小时内准备。
    1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
    2．按10ul生物素标记人IL-1β抗体加人IL-1β抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
    C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
    1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
    2．按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
    D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
    【操作程序】
    1．确定本次检测所需的已包被人IL-1β抗体的酶标板孔数目。
    2．将倍比稀释的人IL-1β标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
    3．酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
    4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
    5．将准备好的生物素人IL-1β抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
    6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
    7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
    8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
    9．按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见人IL-1β标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应zui长不要超过30分钟）。
    10．用酶标仪在450nm测定O.D.值。
    11．根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
    【操作程序总结】：
    准备试剂，样品和人IL-1β标准品
    加入准备好的样品和人IL-1β标准品，37℃反应90分钟
    洗板2次，加入生物素化人IL-1β抗体工作液，37℃反应60分钟
    洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟
    洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应
    加入TMB终止液
    30分钟之内读OD值
    计算标本待测因子含量
  人肺癌标志物ELISA试剂盒上海恒远生物公司保证质量,供应RD,本试剂盒科研,提供代测服务,咨询。

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