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人膀胱癌抗原试剂盒

简要描述:“人膀胱癌抗原试剂盒"服务于高校及免疫学科研单位。产品种类齐全,包括细胞因子,心肌梗塞,自身免疫,肿瘤标志物检测,传染病检测系列等常见ELISA试剂盒。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2016-07-17
  • 访  问  量:251
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详细介绍

elisa法  elisa kit   人膀胱癌抗原
    产品名:
人膀胱癌抗原试剂盒 
    :021—60449724, 
    产品规格:48T/96T 
    保存条件:2-8℃ 
    主要作用:研究使用 
    ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学 的许多领域。 
    (一) 原理 
      ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作 用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去 多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于 检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。    
    (二) 操作步骤 
     方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 
    1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 
    2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 
    3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。 
    4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。 
    5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 
    6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-” 号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴 性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 
    方法二 用于检测未知抗体的间接法:    
    用包被缓冲液将已知抗原稀释至 1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小 时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,zui后一遍用 DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。 
    (三) 试剂器材 
      1. 试剂 
    (1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液): 
    NaCO3 1.59克 NaHCO3  2.93克  加蒸馏水至1000ml   
     (2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml 
    (3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5~10%使用。 
    (4) 终止液(2M H2SO4):蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。 
    (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。 
    (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml0.75%H2O2 32μl 
    (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl 
    (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。 
    (9) 正常人血清和阳性对照血清。 
    2. 器材: 
    (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。 
    (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。 
    (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。 
elisa法  elisa kit   人膀胱癌抗原

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