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考马斯亮蓝R

简要描述:考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,Z大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有Z大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2018-04-25
  • 访  问  量:770
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详细介绍

产品名称:考马斯亮蓝R促销 
    :021—60449724,
    C A S 号:6104-59-2
    产品单位:gm
    产品规格:5/10/50
    化学性质
    考马斯亮蓝有G250和R250两种。
      考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,zui大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有zui大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。
      考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
    考马斯蓝染色
    coomassie blue一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
      考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
    1.Bradford浓染液的配制:
      将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
    2.标准曲线蛋白质样本的准备:
      尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
    3.溶解:
      将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(用PBS)。
    4.稀释:
      按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。
    5.作用:
      每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
    6.计算:
      根据标准曲线计算待测样本的浓度。 
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