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优质兔血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒上海恒远生物专业elisa试剂盒供应商!
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产品用途:科研 实验
产品规格:96T/48T
96T指可以做94个标本,2个标准对照
48T指可以做47个标本,1个标准对照
96T-84个样本
48T-42个样本
有 效 期:6个月
保 存:2-8℃
公司账户信息:
上海恒远生物科技有限公司
开户银行:中国农业银行股份有限公司上海华漕支行
账号:0341 5600 0400 2622 4
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
300ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
150ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
75ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
37.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
Assay procedure
1.Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table:
480pg/ml5 Standard150μl Original density Standard+150μl Standard diluent
240 pg/ml4 Standard150μl 5 Standard+150μl Standard diluent
120 pg/ml3 Standard150μl 4 Standard+150μl Standard diluent
60 pg/ml2 Standard150μl 3 Standard +150μl Standard diluent
30 pg/ml1 Standard150μl 2 Standard +150μl Standard diluent
2.add sample:Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.
3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.
4.Configurate liquid: 30-fold wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.
5.washing:Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.
6.add enzyme:Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.
7.incubate:Operation with 3.
8.washing:Operation with 5.
9.color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃
10.Stop the reaction:Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).
11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.
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上一产品:兔抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒