恒远文献：阿魏酸钠对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护

阿魏酸钠对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护
刘 辉，杨初蔚，刘宇飞 ( 大连医科大学附属第二医院急诊科，辽宁 大连 116023)

［摘 要］ 目的 探讨阿魏酸钠对大鼠心肌缺血再灌注模型心肌功能的影响。方法 选取 60 只 7 ～ 8 周龄［平均( 7． 26 ± 0． 36)周］SD 大鼠，随机平均分为假手术组、心肌再灌注组以及阿魏酸钠组，每组 20 只; 比较灌注后各组大鼠心肌功能指标的变化情况。结果 与假手术组比较，再灌注组以及阿魏酸钠组的左室舒张末压( LVESP) 、大鼠心室大压力( ± dp /dmax) 显著下降，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ; 再灌注 2 h 时 LVESP、± dp /dmax 的下降程度再灌注组明显高于阿魏酸钠组，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ;各组大鼠的 LVEDP 与假手术组比较，呈升高趋势，再灌注 2 h 后，阿魏酸钠组明显低于再灌注组，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ;与假手术组比较，再灌注组与阿魏酸钠组的大鼠凋亡细胞比例明显升高，阿魏酸钠组 Fas 阳性表达比例明显低于再灌注组，差异均具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ; 大鼠血液中 LDH 以及 CK-MB 的含量均明显升高，再灌注组明显高于阿魏酸钠组，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ; 与假手术组比较，心肌再灌注组和阿魏酸钠组 SOD 含量明显降低，但阿魏酸钠组的降低程度低于再灌注组，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) ; 而 MDA 的含量却上升，但阿魏酸钠组的升高程度低于再灌注组，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。结论 阿魏酸钠在一定程度上可以恢复心肌再灌注模型大鼠心肌功能的损伤。

［关键词］阿魏酸钠; 心肌缺血再灌注; 心肌功能; 损伤; 保护

心肌梗死是一种严重的冠状动脉并发症，冠状动脉内的血液供应量大大减少，甚至发生血液循环阻断，导致心肌血液供给不足，引发心肌细胞、组织发生严重的病变［1］。心肌缺血再灌注是指心脏或心肌组织在受到缺血性损伤之后，由于冠状动脉血管阻塞的减轻或者粥样斑块消融，引起血管内的血液重新灌注进入心脏［2］，对心肌组织和心脏造成了进一步的损伤。如何降低心肌缺血再灌注对心肌的损伤、降低死亡率是医学领域亟待解决的难题之一［3］。阿魏酸钠具有很好的抗血小板凝集作用，但对其在心肌缺血再灌注中的作用研究较少［4］。本研究中，我们采用 Longa 法建立了3 h脑缺血再灌注的大鼠模型，能够准确控制缺血和再灌注的部位和时间，可控性较强，并对该模型大鼠使用阿魏酸钠疗，分析其对大鼠缺血、心肌酶含量以及心功能的影响，以期为心肌缺血再灌注损伤的治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器、药品及动物
美国 Harvard 公司的 microvent 动物呼吸机; 动物手术台; 高像素相机; 针管、手术刀等*仪器。阿魏酸钠( 重庆莱美药业股份有限公司生产，规格: 0． 1 克/支，生产批号: 20140523) ; 伊文思蓝( 上海恒远生物科技有限公司，规格为试剂级，生产批号: 20141221) ; TTC( 上海宝曼生物科技有限公司，规格为试剂级，生产批号:20140916) 等*药品。选取年龄为 7 ～ 8 周［平均( 7． 26 ± 0． 36) 周］SD 大鼠( 由我院动物实验中心提供，在正常条件先饲养，动物合格证编号: 20140265)60 只，体质量 220 ～ 260 g，平均( 241． 26 ± 21． 45) g。随机将其均分成 3 组，每组 20 只。
1． 2 方法
1． 2． 1 模型的建立 大鼠处于空腹状态，以50 g /L的水合氯醛作为麻醉剂，按 0． 66 mL /kg 注射到大鼠的体内，待其*麻醉后仰卧位固定。然后分别接入动物呼吸机以及心电监护仪，在大鼠的xong部左侧大约第5 根肋骨处纵向切开，将大鼠的胸腔打开后经心包挑起，使大鼠心脏*暴露，观察肺动脉圆锥和左心耳中间位置，并在左心耳下部大约 1 cm 的位置采用鱼线型进针和穿线，并且使用较小的硅胶管从鱼线的两端位置进行传入，观察监护仪指标，待其达到稳定后结扎，如果很快出现脉搏减弱、左心室心肌颜色发白，并且其心电图的 ST 段显著抬高，表示结扎已经成功。在30 min以后持续对大鼠灌注 3 h，观察心电监护情况，若心电图的 ST 段出现 50% 以上的回落则认为缺血再灌注模型建立成功［5］。假手术组大鼠只进行胸腔打开，然后进行穿线即可，无需进行结扎。在建模之前1 周，阿魏酸钠组大鼠给予注射用阿魏酸钠 15 mg /kg静脉注射，对假手术组以及灌注组大鼠则在同一时间点采取相同的方式注射同体积的生理盐水。
1． 2． 2 血液样本取得 在实验完成后，再次对大鼠的左前降支( LAD) 进行结扎，并在其右侧颈静脉注射2 mL 的 3% 伊文思蓝溶液后快速将大鼠的心脏摘除，将其放在 － 70 ℃ 冷冻 10 min 后切成厚度为1 mm的薄片，并将其在 37 ℃，浓度为 4% 的 2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 中避光培养 15 min 后，放在浓度为 4% 甲醛中 24 h，然后用高像素数码相机拍照后用软件对缺血的程度以及梗死范围进行测定［6］。
1． 3 观察指标观察指标包括: ① 在大鼠缺血之前、缺血以后30 min以及在灌注后 2 h 时观察并记录各组大鼠的心率( HＲ) 、左室舒张末压( LVESP) 、左室收缩末压( LVEDP) 以及大鼠心室大压力上升、下降( ± dp /dmax)情况。②将各组大鼠的心肌组织在福尔马林溶液中进行处理，然后对其进行免疫组化染色后计算 Fas 阳性表达情况。对各组大鼠的心肌组织进行 HE 染色，观察心肌梗死情况。③对各组大鼠血液中的心肌酶情况进行测定: 血液样本室温静置 30 min 后，进行离心处理获得血清，严格根据试剂盒说明书测定大鼠血清中的超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) 、乳酸脱氢酶( LDH) 以及肌酸激酶同工酶( CK-MB) 含量情况。
1． 4 统计学方法采用 SPSS 18． 0 进行统计学处理，计量资料采用均数 ± 标准差( x珋± s) 表示，采用多因素方差分析，P ＜ 0． 05为差异有统计学意义

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