elisa试剂盒操作常见问题

1.ELISA实验需要多长时间?

双抗体夹心ELISA法次实验需要3.5-4小时，竞争ELISA法次实验需要2-2.5小时。

2.血清样本如何处理?

全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 血浆样本如何处理?

建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，于1000×g离心15分钟，仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

4.细胞上清液样本如何处理?

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(1000×g)。仔细收集上清。

5.细胞裂解液样本如何处理?

检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或者超声破碎，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心10分钟左右(5000×g)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6.组织样本如何处理?

用预冷的PSB (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。

7.为什么有的试剂盒是采用竞争ELISA法?

小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法。其原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争抗体上的结合位点，标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的抗体愈少，后的显色也愈浅，即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。小分子激素等ELISA测定多用此法。

8.用什么软件处理ELISA检测的数据比较好?

ELISA标准曲线拟合可以应用Curve Expert软件进行数据分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲线应用到论文之中。软件可以在下载中心进行下载。

9. 试剂盒做的结果不理想怎么办?

实验结果不理想请及时与客服或技术支持联系，我们可以帮您起分析实验结果。如果仅凭实验数据无法判断，您可以将试剂盒发回给我们进行售后检测。

由于篇幅有限，了解详情请关注“恒远生物"微信公众号或，也可以联系我司工作人员了解详情。