免疫组化实验中关键所在之处?

　　实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本常用、基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中shou选的组织标本制作方法。

　　免疫组化常用的染色方法有哪些?

　　根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法是常用的。

　　石蜡切片为什么要做抗原修复?有哪些方法?

　　石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。

　　石蜡切片在染色过程中出现脱片现象：

　　①烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度;

　　②用含有多聚赖氨酸的玻片，可以购买到或这自己做;

　　③有些组织本身就容易掉片，如骨组织等，操作时冲PBS不要直接冲到组织上，冲到组织上方，让它流下冲洗组织;

　　④用高温修复时，温度骤冷也可能引起。

　　它的背景有哪些?

　　①考虑一抗浓度高;

　　②然后调整DAB孵育时间;

　　③也要考虑血清封闭时间是否过短;

　　④适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

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